小鼠骨髓基质细胞

参考用途：OP9细胞株源自新生的op/op 小鼠颅盖。因编码M-CSF的基因中的一个突变，它不能生成有功能的巨噬细胞克隆刺激因子(M-CSF)。M-CSF的存在对胚胎干细胞(ES)分化成血细胞而不是其他巨噬细胞有抑制功能。 OP9细胞可以用于与小鼠胚胎干细胞共培养以诱导胚胎干细胞分化成成红血球来源的、骨髓来源的和B细胞谱系的血细胞。与OP9共培养不需要外源的生长因子或复杂的胚胎结构。这个系统对研究造血细胞的发育和分化的分子机理有用。

培养条件：培养温度37℃；气体环境5%CO2+95%空气；

培养基：OP9细胞专用培养基：80%MEMα+20%FBS

形态特性：成纤维细胞样，长梭形，边缘不规则，单层贴壁生长

培养方法：复苏步骤：①冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中，迅速没入37℃水浴锅，摇晃冻存管加速溶解，以1min内全部溶解为宜；②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内，1000-1200rpm离心5min，弃去上清液，用1-2mL完全培养基重悬细胞。③将细胞悬液加入到含有5-6mL完全培养基的T25瓶中，放入培养箱培养。<br>细胞传代：①将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入1-2mL胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；②镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处，肉眼可见细胞层脱落，即消化完成，否则继续消化），直接吸掉胰酶，加入5-6mL完全培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。③将细胞悬液按1:2比例分到新的T25瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。；④注意培养基pH值变化和细胞密度，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%-90%时，重复传代操作或者冻存。